Odvajanje i pročišćavanje proteina se široko koristi u biohemijskom istraživanju i primjeni i važna je operativna vještina. Kompanija SCG Sistem za prečišćavanje proteina-Saipu Instrument je sastavila sadržaj sirove separacije i finog odvajanjaproteinapročišćenje za sve. Tipična eukariotska ćelija može sadržavati hiljade različitih proteina, neki su vrlo bogati, a neki sadrže samo nekoliko kopija. Da bi se proučio određeni protein, potrebno je prvo pročistiti protein od drugih proteina i neproteinskih molekula.

Grubo odvajanje

Kada se dobije proteinski ekstrakt (ponekad pomešan sa nukleinskim kiselinama, polisaharidima, itd.), odabire se skup odgovarajućih metoda za odvajanje željenihproteinaod drugih nečistoća. Općenito, ovaj korak razdvajanja koristi metode kao što su soljenje, akumulacija izoelektrične tačke i frakcioniranje organskog rastvarača. Ove metode karakteriziraju jednostavnost i veliki kapacitet obrade, koji može ukloniti mnoge nečistoće i koncentrirati otopinu proteina. Neki proteinski ekstrakti su velikog volumena i nisu pogodni za koncentriranje akumulacijom ili soljenjem. Možete odabrati ultrafiltraciju, gel filtraciju, vakuumsko sušenje smrzavanjem ili druge metode koncentracije.

Fino odvajanje

Nakon grubog frakcioniranja uzorka, volumen je općenito mali, a većina nečistoća je uklonjena. Za dalje prečišćavanje, hromatografske metode općenito uključuju gel filtraciju, hromatografiju izmjenom jona, adsorpcionu hromatografiju i afinitetnu hromatografiju. Ako je potrebno, možete odabrati i elektroforezu, uključujući zonsku elektroforezu, set izoelektričnih tačaka, itd. kao završni proces pročišćavanja. Metoda koja se koristi za razdvajanje na nivou podjela općenito je mala u planiranju, ali s visokom rezolucijom.

Kristalizacija je konačni proces odvajanja i pročišćavanja proteina. Iako proces kristalizacije ne osigurava da protein mora biti ujednačen, to je samo kada određeni protein ima prednost u otopini da formira kristal. Sam proces kristalizacije je praćen određenim stepenom pročišćavanja, a prekristalizacija može ukloniti malu količinu krivotvorenog proteina. Pošto je denaturisanproteinanikada nije pronađen tokom procesa kristalizacije, kristalizacija proteina nije samo znak čistoće, već i moćna smjernica za utvrđivanje da je proizvod u svom prirodnom stanju.