Odvajanje i pročišćavanje proteina se široko koristi u biohemijskom istraživanju i primjeni i važna je operativna vještina. Tipična eukariotska ćelija može sadržavati hiljade različitih proteina, neki su vrlo bogati, a neki sadrže samo nekoliko kopija. Da bi se proučilo određenoproteina, potrebno je prvo pročistiti protein od drugih proteina i neproteinskih molekula.

1. Metoda soljenjaproteina:

Neutralna so ima značajan uticaj na rastvorljivost proteina. Generalno, sa povećanjem koncentracije soli pod niskom koncentracijom soli, rastvorljivost proteina se povećava. To se zove soljenje; kada koncentracija soli nastavi da raste, rastvorljivost proteina se smanjuje u različitim stepenima i odvaja se jedan za drugim. Ova pojava se naziva soljenje.

2. Metoda slaganja izoelektričnih tačaka:

Elektrostatička repulzija između čestica je najmanja kada je protein statičan, tako da je i rastvorljivost najmanja. Izoelektrične tačke različitih proteina su različite. pH rastvora za kondicioniranje može se koristiti za dostizanje izoelektrične tačke proteina. Učinite da se akumulira, ali ova metoda se retko koristi sama i može se kombinovati sa metodom isoljavanja.

3. Dijaliza i ultrafiltracija:

Dijaliza koristi polupropusnu membranu za odvajanje proteina različitih molekulskih veličina. Metoda ultrafiltracije koristi visoki pritisak ili centrifugalnu silu kako bi voda i druge male otopljene molekule prošle kroz polupropusnu membranu, dokproteinaostaje na membrani. Možete odabrati različite veličine pora za presretanje proteina različite molekularne težine.

4. Metoda gel filtracije:

Također se naziva hromatografija isključivanja veličine ili kromatografija na molekularnom situ, ovo je jedna od najkorisnijih metoda za odvajanje proteinskih mješavina prema veličini molekula. Najčešće korišteni materijali za pakovanje u koloni su glukozni gel (Sephadex ged) i agarozni gel (agarozni gel).

5.Elektroforeza:

Pod istim pH uslovima, različiti proteini se mogu razdvojiti zbog njihove različite molekularne težine i različitih naboja u električnom polju. Vrijedi obratiti pažnju na elektroforezu izoelektričnog seta, koja koristi amfolit kao nosač. Tokom elektroforeze, amfolit formira pH gradijent koji se postepeno dodaje od pozitivne elektrode do negativne elektrode. Kada protein sa određenim nabojem pliva u njemu, doći će jedan do drugog. pH pozicija električne tačke je diskontinuirana i ova metoda se može koristiti za analizu i pripremu različitih proteina.

6. Ionska komunikaciona kromatografija:

Agensi za ionsku komunikaciju uključuju kationske komunikacione agense (kao što je karboksimetil celuloza; CM-celuloza) i anionske komunikacione agense (dietilaminoetil celuloza). Prilikom prolaska kroz kolonu ionske komunikacijske hromatografije, protein sa suprotnim nabojem u odnosu na ionsko komunikacijsko sredstvo se adsorbira na ionsko komunikacijsko sredstvo, a zatim se adsorbiraproteinase eluira promjenom pH ili jonske snage.

7. Afinitetna hromatografija:

Afinitetna hromatografija je izuzetno korisna metoda za odvajanje proteina. Često je potreban samo jedan korak da se određeni protein odvoji od neuredne mješavine proteina visoke čistoće.

Ova metoda se zasniva na specifičnom, a ne kovalentnom vezivanju određenih proteina na drugi molekul koji se zove ligand (Ligand).

Osnovni princip:

proteini postoje u neurednoj mešavini u tkivima ili ćelijama, a svaki tip ćelije sadrži hiljade različitih proteina. Stoga je razlika između proteina važan dio biohemije i nije bila sama. Ili skup gotovih metoda može ukloniti bilo koju vrstu proteina iz neuredno miješanog proteina, tako da se nekoliko metoda često koristi u kombinaciji.