জৈব রসায়ন গবেষণা এবং প্রয়োগে প্রোটিনের বিচ্ছেদ এবং পরিশোধন ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় এবং এটি একটি গুরুত্বপূর্ণ অপারেশনাল দক্ষতা। একটি সাধারণ ইউক্যারিওটিক কোষে হাজার হাজার বিভিন্ন প্রোটিন থাকতে পারে, কিছু খুব সমৃদ্ধ এবং কিছুতে মাত্র কয়েক কপি থাকে। যাতে একটি নির্দিষ্ট অধ্যয়নপ্রোটিন, এটি প্রথমে অন্যান্য প্রোটিন এবং নন-প্রোটিন অণু থেকে প্রোটিন বিশুদ্ধ করা প্রয়োজন।

1. লবণ আউট পদ্ধতিপ্রোটিন:

নিরপেক্ষ লবণ প্রোটিনের দ্রবণীয়তার উপর উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলে। সাধারণত, কম লবণের ঘনত্বের অধীনে লবণের ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে, প্রোটিনের দ্রবণীয়তা বৃদ্ধি পায়। একে সল্টিং বলা হয়; যখন লবণের ঘনত্ব বাড়তে থাকে, তখন প্রোটিনের দ্রবণীয়তা বিভিন্ন মাত্রায় কমে যায় এবং একের পর এক আলাদা হয়ে যায়। এই ঘটনাটিকে সল্টিং আউট বলা হয়।

2. আইসোইলেকট্রিক পয়েন্ট স্ট্যাকিং পদ্ধতি:

প্রোটিন যখন স্থির থাকে তখন কণার মধ্যে ইলেক্ট্রোস্ট্যাটিক বিকর্ষণ সবচেয়ে ছোট হয়, তাই দ্রবণীয়তাও সবচেয়ে ছোট। বিভিন্ন প্রোটিনের আইসোইলেক্ট্রিক বিন্দু ভিন্ন। কন্ডিশনিং দ্রবণের pH একটি প্রোটিনের আইসোইলেক্ট্রিক পয়েন্টে পৌঁছানোর জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে এটি জমা করুন, তবে এই পদ্ধতিটি খুব কমই একা ব্যবহৃত হয় এবং সল্টিং-আউট পদ্ধতির সাথে মিলিত হতে পারে।

3. ডায়ালাইসিস এবং আল্ট্রাফিল্ট্রেশন:

ডায়ালাইসিস বিভিন্ন আণবিক আকারের প্রোটিন আলাদা করতে একটি আধা-ভেদ্য ঝিল্লি ব্যবহার করে। আল্ট্রাফিল্ট্রেশন পদ্ধতি উচ্চ চাপ বা কেন্দ্রাতিগ শক্তি ব্যবহার করে জল এবং অন্যান্য ছোট দ্রবণীয় অণুগুলি একটি আধা-ভেদ্য ঝিল্লির মধ্য দিয়ে যায়, যখনপ্রোটিনঝিল্লির উপর থেকে যায়। আপনি বিভিন্ন আণবিক ওজনের প্রোটিন আটকাতে বিভিন্ন ছিদ্র আকার চয়ন করতে পারেন।

4. জেল পরিস্রাবণ পদ্ধতি:

সাইজ এক্সক্লুশন ক্রোমাটোগ্রাফি বা আণবিক চালনী ক্রোমাটোগ্রাফিও বলা হয়, এটি আণবিক আকার অনুযায়ী প্রোটিন মিশ্রণকে আলাদা করার জন্য সবচেয়ে দরকারী পদ্ধতিগুলির মধ্যে একটি। কলামে সাধারণত ব্যবহৃত প্যাকিং উপকরণগুলি হল গ্লুকোজ জেল (সেফাডেক্স জেড) এবং অ্যাগারোজ জেল (আগারোজ জেল)।

5. ইলেক্ট্রোফোরেসিস:

একই pH অবস্থার অধীনে, বিভিন্ন প্রোটিন তাদের বিভিন্ন আণবিক ওজন এবং বৈদ্যুতিক ক্ষেত্রের বিভিন্ন চার্জের কারণে পৃথক করা যেতে পারে। এটি আইসোইলেক্ট্রিক সেট ইলেক্ট্রোফোরসিসের দিকে মনোযোগ দেওয়ার মতো, যা একটি বাহক হিসাবে অ্যামফোলাইট ব্যবহার করে। ইলেক্ট্রোফোরসিসের সময়, অ্যামফোলাইট একটি pH গ্রেডিয়েন্ট গঠন করে ধীরে ধীরে ইতিবাচক ইলেক্ট্রোড থেকে নেতিবাচক ইলেক্ট্রোডে যুক্ত হয়। যখন একটি নির্দিষ্ট চার্জযুক্ত প্রোটিন এতে সাঁতার কাটে, তখন এটি একে অপরের কাছে পৌঁছাবে। বৈদ্যুতিক বিন্দুর pH অবস্থান অবিচ্ছিন্ন, এবং এই পদ্ধতিটি বিভিন্ন প্রোটিন বিশ্লেষণ এবং প্রস্তুত করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।

6. আয়ন যোগাযোগ ক্রোমাটোগ্রাফি:

আয়ন কমিউনিকেশন এজেন্টের মধ্যে রয়েছে ক্যাটানিক কমিউনিকেশন এজেন্ট (যেমন কার্বক্সিমিথাইল সেলুলোজ; সিএম-সেলুলোজ) এবং অ্যানিওনিক কমিউনিকেশন এজেন্ট (ডাইথাইলামিনোইথাইল সেলুলোজ)। আয়ন যোগাযোগ ক্রোমাটোগ্রাফি কলামের মধ্য দিয়ে যাওয়ার সময়, আয়ন যোগাযোগ এজেন্টের বিপরীত চার্জ সহ প্রোটিন আয়ন যোগাযোগ এজেন্টে শোষিত হয় এবং তারপরে শোষণ করা হয়প্রোটিনpH বা আয়নিক শক্তি পরিবর্তন করে নির্গত হয়।

7. অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি:

অ্যাফিনিটি ক্রোমাটোগ্রাফি প্রোটিন আলাদা করার জন্য একটি অত্যন্ত দরকারী পদ্ধতি। উচ্চ বিশুদ্ধতার সাথে একটি অগোছালো প্রোটিন মিশ্রণ থেকে বিশুদ্ধ করার জন্য একটি নির্দিষ্ট প্রোটিনকে আলাদা করার জন্য প্রায়শই শুধুমাত্র একটি ধাপের প্রয়োজন হয়।

এই পদ্ধতিটি লিগ্যান্ড (লিগ্যান্ড) নামক অন্য একটি অণুর সাথে নির্দিষ্ট প্রোটিনের সমযোজী বন্ধনের উপর ভিত্তি করে।

মূল নীতি:

প্রোটিন টিস্যু বা কোষে একটি অগোছালো মিশ্রণে বিদ্যমান এবং প্রতিটি ধরণের কোষে হাজার হাজার বিভিন্ন প্রোটিন থাকে। অতএব, প্রোটিনের মধ্যে পার্থক্য বায়োকেমিস্ট্রির একটি গুরুত্বপূর্ণ অংশ, এবং এটি একা নয়। অথবা রেডিমেড পদ্ধতির একটি সেট একটি অগোছালো মিশ্র প্রোটিন থেকে যেকোনো ধরনের প্রোটিন অপসারণ করতে পারে, তাই প্রায়শই সংমিশ্রণে বেশ কয়েকটি পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়।