Нуклеиновата киселина се разделя на дезоксирибонуклеинова киселина (ДНК) и рибонуклеинова киселина (РНК), сред които РНК може да бъде разделена на рибозомна РНК (рРНК), информационна РНК (тРНК) и трансферна РНК (тРНК) според различни функции.

ДНК е концентрирана главно в ядрото, митохондриите и хлоропластите, докато РНК е разпределена главно в цитоплазмата.

Тъй като пуриновите бази и пиримидиновите бази имат конюгирани двойни връзки в нуклеиновите киселини, нуклеиновите киселини имат характеристиките на ултравиолетова абсорбция. Ултравиолетовата абсорбция на натриевите соли на ДНК е около 260 nm и нейната абсорбция се изразява като A260 и е при дъното на абсорбция при 230 nm, така че може да се използва ултравиолетова спектроскопия. Нуклеиновите киселини се определят количествено и качествено с луминометър.

Нуклеиновите киселини са амфолити, които са еквивалентни на поликиселините. Нуклеиновите киселини могат да бъдат дисоциирани на аниони с помощта на неутрални или алкални буфери и поставени в електрическо поле, за да се придвижат към анода. Това е принципът на електрофорезата.

Принципи и изисквания за извличане и пречистване на нуклеинова киселина

1. Осигурете целостта на първичната структура на нуклеиновата киселина

2. Елиминиране на замърсяването на други молекули (като изключване на РНК интерференция при извличане на ДНК)

3. Не трябва да има органични разтворители и високи концентрации на метални йони, които инхибират ензимите в пробите от нуклеинова киселина

4. Намалете възможно най-много макромолекулни вещества като протеини, полизахариди и липиди

Метод за извличане и пречистване на нуклеинова киселина

1. Метод за екстракция с фенол/хлороформ

Изобретен е през 1956 г. След третиране на разбитата клетка или тъканен хомогенат с фенол/хлороформ, компонентите на нуклеиновата киселина, главно ДНК, се разтварят във водната фаза, липидите са главно в органичната фаза, а протеините са разположени между двете фази.

2. Алкохолно утаяване

Етанолът може да елиминира хидратиращия слой на нуклеиновата киселина и да изложи отрицателно заредената фосфатна група, а положително заредените йони като NA﹢ могат да се комбинират с фосфатната група, за да образуват утайка.

3. Хроматографски колонен метод

Чрез специалния адсорбционен материал на базата на силициев диоксид ДНК може да бъде специфично адсорбирана, докато РНК и протеинът могат да преминат безпроблемно и след това да използват висока сол и ниско рН за свързване на нуклеинова киселина и елуиране с ниско сол и високо рН за отделяне и пречистване на нуклеинова киселина киселина.

4. Алкален метод на термичен крекинг

Алкалната екстракция използва главно топологичните разлики между ковалентно затворените кръгови плазмиди и линейния хроматин, за да ги раздели. При алкални условия денатурираните протеини са разтворими.

5. Метод на кипяща пиролиза

ДНК разтворът се обработва топлинно, за да се възползват от свойствата на линейните ДНК молекули да отделят ДНК фрагменти от утайката, образувана от денатурирани протеини и клетъчни остатъци чрез центрофугиране.

6. Метод с наномагнитни перли

Използвайки нанотехнология за подобряване и модифициране на повърхността на суперпарамагнитни наночастици, се приготвят суперпарамагнитни наномагнитни перли от силициев оксид. Магнитните зърна могат специфично да разпознават и ефективно да се свързват с молекули нуклеинови киселини на микроскопичен интерфейс. Използвайки суперпарамагнитните свойства на силициевите наносфери, под действието на хаотропни соли (гуанидин хидрохлорид, гуанидин изотиоцианат и др.) и външно магнитно поле, ДНК и РНК бяха изолирани от кръв, животински тъкани, храна, патогенни микроорганизми и други проби.