Разделянето и пречистването на протеини се използва широко в биохимичните изследвания и приложения и е важно оперативно умение. Типичната еукариотна клетка може да съдържа хиляди различни протеини, някои са много богати, а други съдържат само няколко копия. За да се изучи определенпротеин, е необходимо първо да се пречисти протеина от други протеини и непротеинови молекули.

1. Метод на осоляване напротеин:

Неутралната сол има значително влияние върху разтворимостта на протеина. Като цяло, с увеличаване на концентрацията на сол при ниска концентрация на сол, разтворимостта на протеина се увеличава. Това се нарича осоляване; когато концентрацията на сол продължава да се увеличава, разтворимостта на протеина намалява в различна степен и се отделя един след друг. Това явление се нарича изсоляване.

2. Метод за подреждане на изоелектрична точка:

Електростатичното отблъскване между частиците е най-малко, когато протеинът е статичен, така че разтворимостта също е най-малка. Изоелектричните точки на различните протеини са различни. pH на кондициониращия разтвор може да се използва за достигане на изоелектричната точка на протеина, за да се натрупа, но този метод рядко се използва самостоятелно и може да се комбинира с метода на изсоляване.

3.Диализа и ултрафилтрация:

Диализата използва полупропусклива мембрана за разделяне на протеини с различни молекулни размери. Методът на ултрафилтрация използва високо налягане или центробежна сила, за да накара водата и други малки разтворени молекули да преминат през полупропусклива мембрана, докатопротеиностава върху мембраната. Можете да изберете различни размери на порите, за да прихванете протеини с различно молекулно тегло.

4. Метод на гел филтриране:

Наричан още хроматография с изключване по размер или молекулярно-ситова хроматография, това е един от най-полезните методи за разделяне на протеинови смеси според размера на молекулата. По-често използваните опаковъчни материали в колоната са глюкозен гел (Sephadex ged) и агарозен гел (агарозен гел).

5. Електрофореза:

При едно и също състояние на рН различни протеини могат да бъдат разделени поради техните различни молекулни тегла и различни заряди в електрическото поле. Струва си да се обърне внимание на изоелектричната електрофореза, която използва амфолит като носител. По време на електрофореза амфолитът образува рН градиент, който постепенно се добавя от положителния към отрицателния електрод. Когато протеинът с определен заряд плува в него, те ще достигнат един до друг. Позицията на pH на електрическата точка е прекъсната и този метод може да се използва за анализиране и приготвяне на различни протеини.

6. Йонна комуникационна хроматография:

йонните комуникационни агенти включват катионни комуникационни агенти (като карбоксиметил целулоза; CM-целулоза) и анионни комуникационни агенти (диетиламиноетил целулоза). Когато преминава през йонно-комуникационната хроматографска колона, протеинът с противоположен заряд на йонно-комуникационния агент се адсорбира върху йонно-комуникационния агент и след това адсорбираниятпротеинсе елуира чрез промяна на pH или йонна сила.

7. Афинитетна хроматография:

Афинитетната хроматография е изключително полезен метод за разделяне на протеини. Често се изисква само една стъпка за отделяне на определен протеин, който да бъде пречистен от разхвърляна протеинова смес с висока чистота.

Този метод се основава на специфичното, а не на ковалентното свързване на определени протеини с друга молекула, наречена лиганд (Ligand).

Основният принцип:

протеините съществуват в разхвърляна смес в тъканите или клетките и всеки тип клетка съдържа хиляди различни протеини. Следователно разграничението между протеините е важна част от биохимията и не е само. Или набор от готови методи може да премахне всякакъв вид протеин от разхвърлян смесен протеин, така че няколко метода често се използват в комбинация.