Што такое метад ачысткісістэма ачысткі бялку? Неабходна ведаць кадзіруючую паслядоўнасць ДНК вычышчанага бялку, каб убачыць, у якіх клетках або тканінах назіраецца залішняя экспрэсія ў гене-мішэні, і распрацаваць генныя праймеры для ампліфікацыі arf фрагмента ДНК-мішэні. Гэта так званае набыццё фрагментаў гена-мішэні.
Канструяванне вектара экспрэсіі: у пракарыётычным або эукарыётычным вектары экспрэсіі з характарыстыкамі атрыманай самой экспрэсіі гена галоўная праблема гэтага этапу заключаецца ў канструяванні плазміды і цікавага гена, а таксама сістэмы экспрэсіі. Час экспрэсіі пракарыётаў кароткі, кошт нізкі, і вялікая колькасць экспрэсіі з'яўляецца прыярытэтам; ген не экспрессируется ў E. coli, і праблема ўзнікае ў аптымізацыі кодона. Улічваючы лепшую актыўнасць і ачыстку бялку, даследчыкі вырашылі экспрэсаваць у дрожджах Pichi. Паспяховая экспрэсія аптымізацыі кодона важная.
Які метад ачысткі сістэмы ачысткі бялку:
1. Ападкі.
2. Электрафарэз: зараджаны бялок знаходзіцца вышэй або ніжэй за сваю ізаэлектрычную кропку і можа быць перамешчаны да адмоўнага або станоўчага электрода электрычнага поля ў электрычным полі. Падтрымка плёнкавага электрафарэзу, электрафарэзу і г.д.
3. Дыяліз: метад, які выкарыстоўвае два дыялізных мяшка для аддзялення вялікіх малекул ад бялкоў і маламалекулярных арганічных злучэнняў.
4. Храматаграфія: іонаабменная храматаграфія выкарыстоўвае свабодныя ўласцівасці бялкоў. Пры пэўным pH зарады і ўласцівасці бялкоў розныя, і іх можна падзяліць з дапамогай іонаабменнай храматаграфіі. Пры анионообменной храматаграфіі спачатку элюируются вавёркі з нізкай адмоўнай магутнасцю. Малекулярныя сіты, таксама вядомыя як гель-фільтрацыя. Дробныя бялкі трапляюць у пары і надоўга ў іх застаюцца. Вялікія вавёркі не могуць патрапіць у пары і выцякаць наўпрост.
5. Што такое метад ачысткісістэма ачысткі бялку? Ультрацэнтрыфугаванне: ачыстка бялку можа выкарыстоўвацца для вызначэння малекулярнай масы і можа выкарыстоўвацца ў якасці бялку. Аддзяляецца адукацыя бялкоў з рознай шчыльнасцю.
Час публікацыі: 21 красавіка 2021 г