Нуклеінавая кіслата падзяляецца на дэзаксірыбануклеінавую кіслату (ДНК) і рыбануклеінавую кіслату (РНК), сярод якіх РНК можна падзяліць на рыбасомальную РНК (рРНК), інфармацыйную РНК (мРНК) і пераносную РНК (тРНК) у адпаведнасці з рознымі функцыямі.
ДНК у асноўным сканцэнтравана ў ядры, мітахондрыях і хларапластах, а РНК у асноўным размяркоўваецца ў цытаплазме.
Паколькі пурынавыя асновы і пірымідынавыя асновы маюць кан'югаваныя двайныя сувязі ў нуклеінавых кіслотах, нуклеінавыя кіслоты валодаюць характарыстыкамі паглынання ультрафіялету. Ультрафіялетавае паглынанне натрыевых соляў ДНК складае каля 260 нм, а яго паглынанне выражаецца як A260, і яно знаходзіцца на беразе паглынання пры 230 нм, таму можна выкарыстоўваць ультрафіялетавую спектраскапію. Нуклеінавыя кіслоты колькасна і якасна вызначаюць люминометром.
Нуклеінавыя кіслоты - гэта амфаліты, якія эквівалентныя полікіслотам. Нуклеінавыя кіслоты могуць быць дысацыяваныя на аніёны з дапамогай нейтральных або шчолачных буфераў і змешчаны ў электрычнае поле для руху да анода. Гэта прынцып электрафарэзу.
Прынцыпы і патрабаванні да вылучэння і ачысткі нуклеінавых кіслот
1. Забяспечыць цэласнасць першаснай структуры нуклеінавых кіслот
2. Ліквідаваць забруджванне іншымі малекуламі (напрыклад, выключыць інтэрферэнцыю РНК пры вылучэнні ДНК)
3. У пробах нуклеінавых кіслот не павінна быць арганічных растваральнікаў і высокіх канцэнтрацый іёнаў металаў, якія інгібіруюць ферменты
4. Паменшыце колькасць макрамалекулярных рэчываў, такіх як бялкі, поліцукрыды і ліпіды, наколькі гэта магчыма
Метад экстракцыі і ачысткі нуклеінавых кіслот
1. Метад экстракцыі фенолам/хлараформам
Ён быў вынайдзены ў 1956 г. Пасля апрацоўкі разбітай клетачнай вадкасці або тканкавага гамагенату фенолам/хлараформам кампаненты нуклеінавых кіслот, галоўным чынам ДНК, раствараюцца ў воднай фазе, ліпіды ў асноўным знаходзяцца ў арганічнай фазе, а вавёркі размяшчаюцца паміж двума фазы.
2. Спіртавы асадак
Этанол можа ліквідаваць пласт гідратацыі нуклеінавай кіслаты і агаліць адмоўна зараджаную фасфатную групу, а станоўча зараджаныя іёны, такія як NA﹢, могуць злучацца з фасфатнай групай, утвараючы асадак.
3. Метад храматаграфічнай калонкі
Дзякуючы спецыяльнаму адсорбцыйнаму матэрыялу на аснове дыяксіду крэмнія ДНК можа быць спецыяльна адсарбавана, у той час як РНК і бялок могуць бесперашкодна праходзіць, а затым выкарыстоўваць высокі ўзровень солі і нізкі pH для звязвання нуклеінавых кіслот і элюіраванне нізкім утрыманнем солі і высокім pH для аддзялення і ачысткі нуклеінавых кіслата.
4. Метад тэрмічнага крэкінгу шчолаччу
Шчолачная экстракцыя ў асноўным выкарыстоўвае тапалагічныя адрозненні паміж кавалентна замкнёнымі кругавымі плазмідамі і лінейным храмацінам для іх падзелу. У шчолачных умовах дэнатураваныя вавёркі растваральныя.
5. Метад кіпячага піролізу
Раствор ДНК падвяргаецца тэрмічнай апрацоўцы, каб скарыстацца ўласцівасцямі лінейных малекул ДНК аддзяляць фрагменты ДНК ад асадка, утворанага дэнатураванымі вавёркамі і клеткавым смеццем пры цэнтрыфугаванні.
6. Метад нанамагнітных шарыкаў
Выкарыстоўваючы нанатэхналогіі для паляпшэння і мадыфікацыі паверхні суперпарамагнітных наначасціц, суперпарамагнітныя нанамагнітныя шарыкі аксіду крэмнію падрыхтаваны. Магнітныя шарыкі могуць спецыяльна распазнаваць і эфектыўна звязвацца з малекуламі нуклеінавых кіслот на мікраскапічным інтэрфейсе. Выкарыстоўваючы суперпарамагнітныя ўласцівасці нанасфер кремнезема, пад дзеяннем хаатропных соляў (гуанідзіна гідрахларыд, гуанідзіна изотиоцианат і інш.) і вонкавага магнітнага поля былі вылучаныя ДНК і РНК з крыві, тканак жывёл, ежы, патагенных мікраарганізмаў і іншых узораў.
Час публікацыі: 18 сакавіка 2022 г