Метад і прынцып экстракцыі ў калонцы экстракцыі нуклеінавых кіслот

Нуклеінавая кіслата падзяляецца на дэзаксірыбануклеінавую кіслату (ДНК) і рыбануклеінавую кіслату (РНК), сярод якіх РНК можна падзяліць на рыбасомальную РНК (рРНК), інфармацыйную РНК (мРНК) і пераносную РНК (тРНК) у адпаведнасці з рознымі функцыямі.

ДНК у асноўным сканцэнтравана ў ядры, мітахондрыях і хларапластах, а РНК у асноўным размяркоўваецца ў цытаплазме.

Паколькі пурынавыя асновы і пірымідынавыя асновы маюць кан'югаваныя двайныя сувязі ў нуклеінавых кіслотах, нуклеінавыя кіслоты валодаюць характарыстыкамі паглынання ультрафіялету. Ультрафіялетавае паглынанне натрыевых соляў ДНК складае каля 260 нм, а яго паглынанне выражаецца як A260, і яно знаходзіцца на беразе паглынання пры 230 нм, таму можна выкарыстоўваць ультрафіялетавую спектраскапію. Нуклеінавыя кіслоты колькасна і якасна вызначаюць люминометром.

Нуклеінавыя кіслоты - гэта амфаліты, якія эквівалентныя полікіслотам. Нуклеінавыя кіслоты могуць быць дысацыяваныя на аніёны з дапамогай нейтральных або шчолачных буфераў і змешчаны ў электрычнае поле для руху да анода. Гэта прынцып электрафарэзу.

Метад і прынцып экстракцыі ў калонцы экстракцыі нуклеінавых кіслот

Прынцыпы і патрабаванні да вылучэння і ачысткі нуклеінавых кіслот

1. Забяспечыць цэласнасць першаснай структуры нуклеінавых кіслот

2. Ліквідаваць забруджванне іншымі малекуламі (напрыклад, выключыць інтэрферэнцыю РНК пры вылучэнні ДНК)

3. У пробах нуклеінавых кіслот не павінна быць арганічных растваральнікаў і высокіх канцэнтрацый іёнаў металаў, якія інгібіруюць ферменты

4. Паменшыце колькасць макрамалекулярных рэчываў, такіх як бялкі, поліцукрыды і ліпіды, наколькі гэта магчыма

Метад экстракцыі і ачысткі нуклеінавых кіслот

1. Метад экстракцыі фенолам/хлараформам

Ён быў вынайдзены ў 1956 годзе. Пасля апрацоўкі разбітай клетачнай вадкасці або тканкавага гамагенату фенолам/хлараформам кампаненты нуклеінавых кіслот, у асноўным ДНК, раствараюцца ў воднай фазе, ліпіды ў асноўным знаходзяцца ў арганічнай фазе, а вавёркі знаходзяцца паміж двума фазы.

2. Спіртавы асадак

Этанол можа ліквідаваць пласт гідратацыі нуклеінавай кіслаты і агаліць адмоўна зараджаную фасфатную групу, а станоўча зараджаныя іёны, такія як NA﹢, могуць злучацца з фасфатнай групай, утвараючы асадак.

3. Метад храматаграфічнай калонкі

Дзякуючы спецыяльнаму адсорбцыйнаму матэрыялу на аснове дыяксіду крэмнія ДНК можа быць спецыяльна адсарбавана, у той час як РНК і бялок могуць бесперашкодна праходзіць, а затым выкарыстоўваць высокі ўзровень солі і нізкі pH для звязвання нуклеінавых кіслот і элюіраванне нізкім утрыманнем солі і высокім pH для аддзялення і ачысткі нуклеінавых кіслата.

4. Метад тэрмічнага крэкінгу шчолаччу

Шчолачная экстракцыя ў асноўным выкарыстоўвае тапалагічныя адрозненні паміж кавалентна замкнёнымі кругавымі плазмідамі і лінейным храмацінам для іх падзелу. У шчолачных умовах дэнатураваныя вавёркі растваральныя.

5. Метад кіпячага піролізу

Раствор ДНК падвяргаецца тэрмічнай апрацоўцы, каб скарыстацца ўласцівасцямі лінейных малекул ДНК аддзяляць фрагменты ДНК ад асадка, утворанага дэнатураванымі вавёркамі і клеткавым смеццем пры цэнтрыфугаванні.

6. Метад нанамагнітных шарыкаў

Выкарыстоўваючы нанатэхналогіі для паляпшэння і мадыфікацыі паверхні суперпарамагнітных наначасціц, суперпарамагнітныя нанамагнітныя шарыкі аксіду крэмнію падрыхтаваны. Магнітныя шарыкі могуць спецыяльна распазнаваць і эфектыўна звязвацца з малекуламі нуклеінавых кіслот на мікраскапічным інтэрфейсе. Выкарыстоўваючы суперпарамагнітныя ўласцівасці нанасфер кремнезема, пад дзеяннем хаатропных соляў (гуанідзіна гідрахларыд, гуанідзіна изотиоцианат і інш.) і вонкавага магнітнага поля былі вылучаныя ДНК і РНК з крыві, тканак жывёл, ежы, патагенных мікраарганізмаў і іншых узораў.


Час публікацыі: 18 сакавіка 2022 г