Метады і ачыстка ачысткі бялку

Метады аачышчэнне бялкоў:

Метад ачысткі бялку, аддзяленне і ачыстка бялку, бялок вызваляецца з зыходных клетак або тканін у раствораным стане і застаецца ў зыходным натуральным стане без страты біялагічнай актыўнасці. Па гэтай прычыне матэрыял павінен выдаляць жывёлы і тлушчавую тканіну, насенны матэрыял павінен нават ачысціць ад забруджвання абалонкі насення такімі рэчывамі, як дубільныя рэчывы, а алейнае насенне пажадана выкарыстоўваць у нізкакіпячым арганічным растваральніку.

1. Метад ачысткі бялку, памер і розныя метады аналізу падзелу: дыяліз і ультрафільтрацыя выкарыстоўваюць гэтыя вавёркі для праходжання праз прыроду малекул, якія не могуць прайсці праз паўпранікальную мембрану; цэнтрыфугаванне ў градыенце шчыльнасці Якасць і шчыльнасць бялку ў асяроддзі будзе мець большы ўплыў на часціцы. Хуткасць ссядання хутчэй; гель-фільтраванне - гэта разнавіднасць колоночной храматаграфіі.

2. Раздзяленне розніцы ў растваральнасці пры выкарыстанні: электраасаджэнне, таму што агульны зарад бялковых малекул знаходзіцца ў нулявой ізаэлектрычнай кропцы, памяншаючы электрастатычнае адштурхванне паміж малекуламі, лёгкае агрэгаванне і мінімальная растваральнасць; раствор солі, які выкарыстоўваецца з растворам солі Канцэнтрацыя павялічвае або памяншае растваральнасць бялку.

3. Зарад падзяляецца і аналізуецца рознымі метадамі, асноўны змест ўключае электрафарэз і іонаабменную храматаграфію.

4. Метады аачышчэнне бялкоўСелектыўная адсорбцыя і падзел бялкоў выкарыстоўваюць сілу адсорбцыі часціц.

5. Аффинная храматаграфія заснавана на падзеле лігандаў. Гэтая біялагічная характарыстыка дазваляе малекулам бялку спецыфічна, а не кавалентна звязвацца з іншай малекулай, званай лігандам.

6. Метад ачысткі бялку: нізкатэмпературны метад асаджэння арганічным растваральнікам: выкарыстоўвайце арганічныя растваральнікі, якія змешваюцца з вадой, такія як метанол, этанол, каб паменшыць растваральнасць і выпадзенне большасці бялкоў. Гэты метад вышэй, чым разрозненне высаливания, але бялок больш дэнатуруе Калі лёгка, гэта трэба рабіць пры нізкай тэмпературы.

6ca4b93f5

Як ачысціцьачышчэнне бялкоў:

Як ачысціць бялок, бялок - гэта вялікая малекула альбуміна з рознымі памерамі малекул. Ёсць некалькі больш простых метадаў падзелу бялку і матэрыялаў з малымі малекуламі, а таксама бялковай сумесі. Асноўнымі метадамі падзелу бялкоў рознага малекулярнага памеру з'яўляюцца дыяліз, ультрафільтрацыя, гель-фільтрацыя і цэнтрабежнае падзел. У метадах падзелу бялкоў звычайна выкарыстоўваюцца дыяліз і ультрафільтрацыя. Сумесь для дыялізу, якую трэба падзяліць, змяшчаюць у дыялізны мяшок з паўпранікальнай мембраны, а затым апускаюць у дыялізны раствор для падзелу. Ультрафільтрацыя - гэта працэс прапускання вады і іншых малых малекул з выкарыстаннем цэнтрабежнай сілы або ціску ў паўпранікальнай мембране і ўлоўлівання бялкоў у паўпранікальнай мембране. Гэтыя два метады можна аддзяліць ад макрамалекул на аснове бялку і малых малекул на аснове неарганічнай солі. Іх часта высалёўваюць, выкарыстоўваюць у спалучэнні з метадам растварэння солі або могуць выкарыстоўваць для выдалення гэтых двух метадаў пасля высалення з дапамогай раствораў неарганічнай солі.

1. Як ачысціць бялок метадам высаливания: асновай метаду высаливания з'яўляецца тое, што растваральнасць бялку ў разведзеным растворы солі будзе павялічвацца з павелічэннем канцэнтрацыі солі, але калі канцэнтрацыя солі павялічваецца да пэўнага значэння, актыўнасць вады павялічыцца. Зніжэнне, якое, у сваю чаргу, можа прывесці да таго, што некаторыя вавёркі генеруюць зарады праз паверхню малекулярнай структуры, паступова нейтралізуюцца, і гідратацыйная мембрана паступова разбураецца, што ў канчатковым выніку можа прывесці да агламерацыі і выпадзення агламерацыі звязаных бялкоў і малекул з розных раствораў.

2. Метад асаджэння арганічным растваральнікам: ёсць дзве прычыны для памяншэння растваральнасці бялку ў арганічных растваральніках: як ачысціць бялок як раствор солі з дэгідратацыяй; па-другое, дыэлектрычная пранікальнасць арганічных растваральнікаў, чым вада можа быць зніжана ў палярных растваральніках.

3. Асаджвальнік бялку: бялок у якасці асаджальніка дзейнічае толькі на адзін тып або адзін з ападкаў бялку, распаўсюджанымі з'яўляюцца шчолач, бялок, лекцін і цяжкія металы.

4. Асаджэнне поліэтыленгліколю: Як ачысціць вадараспушчальныя неіённыя палімеры дляачышчэнне бялкоў, такія як поліэтыленгліколь і декстрансульфат натрыю для асаджэння бялкоў.


Час публікацыі: 27 кастрычніка 2020 г