Zülalların ayrılması və təmizlənməsi biokimya tədqiqatlarında və tətbiqində geniş istifadə olunur və mühüm əməliyyat bacarığıdır. Tipik bir eukaryotik hüceyrədə minlərlə müxtəlif zülal ola bilər, bəziləri çox zəngindir, bəziləri isə yalnız bir neçə nüsxədən ibarətdir. Müəyyən bir şey öyrənmək üçünprotein, əvvəlcə zülalı digər zülallardan və zülal olmayan molekullardan təmizləmək lazımdır.

1. Tuzlama üsuluprotein:

Neytral duz zülalın həllinə əhəmiyyətli təsir göstərir. Ümumiyyətlə, aşağı duz konsentrasiyası altında duz konsentrasiyasının artması ilə zülalın həllolma qabiliyyəti artır. Buna duzlama deyilir; duz konsentrasiyası artmağa davam etdikdə, zülalın həllolma qabiliyyəti müxtəlif dərəcələrdə azalır və bir-birinin ardınca ayrılır. Bu fenomen duzlaşma adlanır.

2. İzoelektrik nöqtələrin yığılması üsulu:

Zülal statik olduqda hissəciklər arasında elektrostatik itələmə ən kiçikdir, buna görə də həllolma qabiliyyəti də ən kiçikdir. Müxtəlif zülalların izoelektrik nöqtələri fərqlidir. Kondisioner məhlulunun pH-ı zülalın izoelektrik nöqtəsinə çatmaq üçün istifadə edilə bilər, onu toplayın, lakin bu üsul nadir hallarda tək istifadə olunur və duzlama üsulu ilə birləşdirilə bilər.

3.Dializ və ultrafiltrasiya:

Dializ müxtəlif molekulyar ölçülü zülalları ayırmaq üçün yarı keçirici membrandan istifadə edir. Ultrasüzgəc üsulu yüksək təzyiq və ya mərkəzdənqaçma qüvvəsindən istifadə edərək suyun və digər kiçik həll olunan molekulların yarıkeçirici membrandan keçməsini təmin edir.proteinmembranda qalır. Müxtəlif molekulyar çəkilərdəki zülalları tutmaq üçün müxtəlif məsamə ölçülərini seçə bilərsiniz.

4.Gel filtrasiya üsulu:

Ölçü istisna xromatoqrafiyası və ya molekulyar ələk xromatoqrafiyası da adlanır, bu, protein qarışıqlarını molekulyar ölçüyə görə ayırmaq üçün ən faydalı üsullardan biridir. Sütunda daha çox istifadə edilən qablaşdırma materialları qlükoza geli (Sephadex ged) və agaroz gelidir (agaroz gelidir).

5. Elektroforez:

Eyni pH şəraitində müxtəlif molekulyar çəkilərə və elektrik sahəsində fərqli yüklərə görə müxtəlif zülallar ayrıla bilər. Bir amfoliti daşıyıcı kimi istifadə edən izoelektrik dəst elektroforezinə diqqət yetirməyə dəyər. Elektroforez zamanı amfolit müsbət elektroddan mənfi elektroda tədricən əlavə olunan pH qradiyenti əmələ gətirir. Müəyyən bir yükü olan zülal içində üzdükdə, bir-birinə çatacaq. Elektrik nöqtəsinin pH mövqeyi fasiləsizdir və bu üsul müxtəlif zülalları təhlil etmək və hazırlamaq üçün istifadə edilə bilər.

6.İon rabitə xromatoqrafiyası:

ion rabitə agentlərinə katyonik rabitə agentləri (məsələn, karboksimetilselüloz; CM-selüloz) və anion rabitə agentləri (dietilaminoetilselüloz) daxildir. İon rabitəsi xromatoqrafiyası sütunundan keçərkən, ion əlaqə agentinə əks yüklü zülal ion rabitə agentində adsorbsiya edilir, sonra isə adsorbsiya olunur.proteinpH və ya ion gücü dəyişdirilərək elüt edilir.

7. Yaxınlıq xromatoqrafiyası:

Yaxınlıq xromatoqrafiyası zülalları ayırmaq üçün son dərəcə faydalı bir üsuldur. Çox vaxt müəyyən bir zülalın yüksək saflığa malik qarışıq bir protein qarışığından təmizlənməsi üçün yalnız bir addım tələb olunur.

Bu üsul müəyyən zülalların liqand (Liqand) adlanan başqa bir molekula kovalent deyil, spesifik bağlanmasına əsaslanır.

Əsas prinsip:

zülallar toxumalarda və ya hüceyrələrdə qarışıq bir qarışıqda mövcuddur və hər hüceyrə növü minlərlə fərqli zülal ehtiva edir. Buna görə də, zülallar arasındakı fərq biokimyanın vacib bir hissəsidir və tək deyil. Və ya bir sıra hazır üsullar qarışıq qarışıq zülaldan istənilən növ proteini çıxara bilər, buna görə də bir neçə üsul tez-tez kombinasiyada istifadə olunur.