طرقتنقية البروتين:

طريقة تنقية البروتين وفصل وتنقية البروتين، حيث يتحرر البروتين من الخلايا أو الأنسجة الأصلية في حالة مذابة ويبقى في حالته الطبيعية الأصلية دون فقدان النشاط البيولوجي. لهذا السبب، يجب أن تزيل المادة الأنسجة الحيوانية والدهنية، ويجب أن تزيل مادة البذور أيضًا تلوث غلاف البذرة من مواد مثل العفص، ويفضل أن تستخدم البذور الزيتية مذيبًا عضويًا منخفض الغليان.

1. طريقة تنقية البروتين وحجمه وطرق تحليل الانفصال المختلفة: غسيل الكلى والترشيح الفائق تستخدم هذه البروتينات للمرور عبر طبيعة الجزيئات التي لا تستطيع المرور عبر الغشاء شبه المنفذ؛ الطرد المركزي المتدرج الكثافة سيكون لجودة وكثافة البروتين في الوسط تأثير أكبر على الجزيئات. سرعة التسوية أسرع. الترشيح الهلامي هو نوع من كروماتوغرافيا العمود.

2. فصل فرق الذوبان في الاستخدام: الترسيب الكهربائي لأن الشحنة الصافية لجزيئات البروتين تكون عند نقطة كهروضوئية صفر، مما يقلل من التنافر الكهروستاتيكي بين الجزيئات، وسهل التجميع، والحد الأدنى من الذوبان؛ المحلول الملحي المستخدم مع المحلول الملحي يزيد التركيز أو يقلل من ذوبان البروتين.

3. يتم فصل الشحنة وتحليلها بطرق مختلفة، وتشمل المحتويات الرئيسية الرحلان الكهربائي وكروماتوغرافيا التبادل الأيوني.

4. طرقتنقية البروتينيستخدم الامتزاز الانتقائي وفصل البروتينات قوة امتصاص الجسيمات.

5. يعتمد كروماتوغرافيا التقارب على فصل الروابط. تسمح هذه الخاصية البيولوجية لجزيئات البروتين بالارتباط على وجه التحديد، وليس تساهميًا، بجزيء آخر يسمى اللجند.

6. طريقة تنقية البروتين: طريقة الترسيب بالمذيبات العضوية ذات درجة الحرارة المنخفضة: استخدام المذيبات العضوية القابلة للامتزاج مع الماء، مثل الميثانول والإيثانول، لتقليل ذوبان وترسيب معظم البروتينات. هذه الطريقة أعلى من دقة التمليح، لكن البروتين يفسد بشكل أكبر. عندما تكون سهلة، يجب أن يتم ذلك عند درجة حرارة منخفضة.

كيفية التطهيرتنقية البروتين:

كيفية تنقية البروتين، البروتين هو جزيء كبير، وأحجام جزيئية مختلفة من الألبومين، هناك بعض الطرق الأبسط لفصل البروتين والمواد الجزيئية الصغيرة، وكذلك فصل خليط البروتين. الطرق الرئيسية لفصل البروتينات ذات الأحجام الجزيئية المختلفة هي غسيل الكلى، والترشيح الفائق، والترشيح الهلامي، والفصل بالطرد المركزي. يشيع استخدام غسيل الكلى والترشيح الفائق في طرق فصل البروتين. يتم وضع خليط غسيل الكلى المراد فصله في كيس غسيل الكلى المصنوع من غشاء نصف منفذ، ثم يتم غمره في محلول غسيل الكلى من أجل الانفصال. الترشيح الفائق هو عملية تمرير الماء والجزيئات الصغيرة الأخرى باستخدام قوة الطرد المركزي أو الضغط في غشاء شبه منفذ ومحاصرة البروتينات في الغشاء شبه المنفذ. يمكن فصل هاتين الطريقتين عن الجزيئات الكبيرة القائمة على البروتين والجزيئات الصغيرة القائمة على الملح غير العضوي. غالبًا ما يتم تمليحها، أو استخدامها جنبًا إلى جنب مع طريقة إذابة الملح، أو يمكن إدخالها لإخراج هاتين الطريقتين بعد التمليح باستخدام محاليل الملح غير العضوية.

1. كيفية تنقية البروتين بطريقة التمليح: أساس طريقة التمليح هو أن ذوبان البروتين في محلول الملح المخفف يزداد مع زيادة تركيز الملح، ولكن عندما يزيد تركيز الملح إلى قيمة معينة، فإن ذوبان البروتين في محلول الملح المخفف يزداد مع زيادة تركيز الملح، ولكن عندما يزيد تركيز الملح إلى قيمة معينة، سيتم زيادة النشاط المائي. النقصان، والذي بدوره يمكن أن يتسبب في قيام بعض البروتينات بتوليد شحنات من خلال سطح البنية الجزيئية ليتم تحييدها تدريجيًا، ويتم تدمير غشاء الماء تدريجيًا، مما قد يؤدي في النهاية إلى تطوير البروتينات والجزيئات ذات الصلة للتكتل والترسيب من محاليل مختلفة.

2. طريقة الترسيب بالمذيبات العضوية: هناك سببان لتقليل ذوبان البروتين في المذيبات العضوية: كيفية تنقية البروتين كمحلول ملحي مع الجفاف؛ ثانيا، يمكن تقليل ثابت العزل الكهربائي للمذيبات العضوية مقارنة بالماء في المذيبات القطبية.

3. عامل ترسيب البروتين: البروتين كعامل ترسيب يعمل فقط على نوع واحد أو نوع واحد من ترسيب البروتين، والأنواع الشائعة منها هي القلوية والبروتين والليكتين والمعادن الثقيلة.

4. ترسيب البولي إيثيلين جلايكول: كيفية تنقية البوليمرات غير الأيونية القابلة للذوبان في الماءتنقية البروتين، مثل البولي إيثيلين جلايكول وكبريتات ديكستران الصوديوم لترسيب البروتينات.