ኑክሊክ አሲድ የማውጣት ዓምድ የማውጣት ዘዴ እና መርህ

ኑክሊክ አሲድ ዲኦክሲራይቦኑክሊክ አሲድ (ዲ ኤን ኤ) እና ራይቦኑክሊክ አሲድ (አር ኤን ኤ) የተከፋፈለ ሲሆን ከእነዚህም መካከል አር ኤን ኤ ወደ ራይቦሶማል አር ኤን ኤ (አር ኤን ኤ)፣ መልእክተኛ አር ኤን ኤ (ኤምአርኤን) እና አር ኤን ኤ (tRNA) እንደ ተለያዩ ተግባራት ሊከፋፈል ይችላል።

ዲ ኤን ኤ በዋናነት በኒውክሊየስ፣ ሚቶኮንድሪያ እና ክሎሮፕላስትስ ውስጥ የተከማቸ ሲሆን አር ኤን ኤ በዋናነት በሳይቶፕላዝም ውስጥ ይሰራጫል።

የፕዩሪን መሠረቶች እና የፒሪሚዲን መሠረቶች በኑክሊክ አሲዶች ውስጥ ሁለት ጊዜ ትስስር ስላላቸው ኑክሊክ አሲዶች የአልትራቫዮሌት መምጠጥ ባህሪያት አሏቸው። የዲ ኤን ኤ ሶዲየም ጨዎችን የአልትራቫዮሌት መምጠጥ ወደ 260nm አካባቢ ነው ፣ እና የመምጠጥ መጠኑ A260 ተብሎ ይገለጻል ፣ እና በ 230 nm የመጠጫ ገንዳ ላይ ነው ፣ ስለሆነም አልትራቫዮሌት ስፔክትሮስኮፒን መጠቀም ይቻላል ። ኑክሊክ አሲዶች በቁጥር እና በጥራት የሚወሰኑት በ luminometer ነው።

ኑክሊክ አሲዶች ከፖሊሲድ ጋር እኩል የሆኑ አምፖላይቶች ናቸው። ኑክሊክ አሲዶች ገለልተኛ ወይም የአልካላይን መከላከያዎችን በመጠቀም ወደ አኒዮኖች ሊከፋፈሉ እና በኤሌክትሪክ መስክ ውስጥ ወደ አኖዶው እንዲሄዱ ማድረግ ይቻላል. ይህ የኤሌክትሮፊዮሬሲስ መርህ ነው.

ኑክሊክ አሲድ የማውጣት ዓምድ የማውጣት ዘዴ እና መርህ

ኑክሊክ አሲድ ማውጣት እና የመንጻት መርሆዎች እና መስፈርቶች

1. የኒውክሊክ አሲድ የመጀመሪያ ደረጃ መዋቅርን ትክክለኛነት ያረጋግጡ

2. የሌሎች ሞለኪውሎች ብክለትን ያስወግዱ (እንደ ዲ ኤን ኤ በሚወጣበት ጊዜ የ RNA ጣልቃ ገብነትን ሳይጨምር)

3. በኑክሊክ አሲድ ናሙናዎች ውስጥ ኢንዛይሞችን የሚከለክሉ ኦርጋኒክ ፈሳሾች እና ከፍተኛ የብረት ionዎች መኖር የለባቸውም።

4. በተቻለ መጠን እንደ ፕሮቲኖች, ፖሊሶካካርዴ እና ሊፒድስ የመሳሰሉ ማክሮ ሞለኪውላር ንጥረ ነገሮችን ይቀንሱ.

ኑክሊክ አሲድ የማውጣት እና የማጥራት ዘዴ

1. የፔኖል / ክሎሮፎርም የማውጣት ዘዴ

የተፈለሰፈው በ1956 ነው። የተሰባበረውን ሴል የተሰበረውን ፈሳሽ ወይም ቲሹ ሆሞናቴትን በ phenol/chloroform ከታከመ በኋላ የኑክሊክ አሲድ ክፍሎች በዋናነት ዲ ኤን ኤ በውሃ ውስጥ ይሟሟቸዋል ፣ ቅባቶች በዋነኝነት በኦርጋኒክ ክፍል ውስጥ ይገኛሉ እና ፕሮቲኖች በሁለቱ መካከል ይገኛሉ ። ደረጃዎች.

2. የአልኮል ዝናብ

ኤታኖል የኒውክሊክ አሲድ እርጥበት ሽፋንን ያስወግዳል እና በአሉታዊ ኃይል የተሞላውን የፎስፌት ቡድን ያጋልጣል፣ እና እንደ NA﹢ ያሉ አዎንታዊ ኃይል ያላቸው ionዎች ከፎስፌት ቡድን ጋር በማጣመር ዝናብ መፍጠር ይችላሉ።

3. Chromatographic አምድ ዘዴ

ልዩ በሆነው ሲሊካ ላይ በተመረኮዘ የማስታወሻ ቁሳቁስ አማካኝነት ዲ ኤን ኤ በተለየ መልኩ ሊጣመር ይችላል፣ አር ኤን ኤ እና ፕሮቲን ደግሞ ያለችግር ማለፍ ይችላሉ፣ ከዚያም ከፍተኛ ጨው እና ዝቅተኛ ፒኤች በመጠቀም ኑክሊክ አሲድን ለማሰር፣ እና ኑክሊክን ለመለየት እና ለማጣራት በትንሽ ጨው እና ከፍተኛ ፒኤች በመጠቀም። አሲድ.

4. የሙቀት ስንጥቅ አልካሊ ዘዴ

የአልካላይን ማውጣት በዋናነት በ covalently በተዘጋ ክብ ፕላዝማይድ እና መስመራዊ chromatin መካከል ያለውን የቶፖሎጂ ልዩነት ይጠቀማል። በአልካላይን ሁኔታዎች ውስጥ, የተዳከሙ ፕሮቲኖች ይሟሟሉ.

5. የፈላ የፒሮሊሲስ ዘዴ

የዲ ኤን ኤ መፍትሄው በሙቀት-የታከመ የዲ ኤን ኤ ሞለኪውሎች ባህሪያትን በመጠቀም የዲ ኤን ኤ ፍርስራሾችን በተቆራረጡ ፕሮቲኖች እና ሴሉላር ፍርስራሾችን በሴንትሪፍግሽን ለመለየት ነው።

6. ናኖማግኔቲክ ዶቃዎች ዘዴ

ናኖቴክኖሎጂን በመጠቀም የሱፐርፓራማግኔቲክ ናኖፓርቲሎች ገጽታን ለማሻሻል እና ለማሻሻል, ሱፐርፓራማግኔቲክ ሲሊኮን ኦክሳይድ ናኖ-ማግኔቲክ ዶቃዎች ይዘጋጃሉ. መግነጢሳዊ ዶቃዎች በአጉሊ መነጽር በይነገጽ ላይ የሚገኙትን ኑክሊክ አሲድ ሞለኪውሎችን ለይቶ ማወቅ እና በብቃት ማያያዝ ይችላሉ። ሲሊካ nanospheres ያለውን superparamagnetic ንብረቶች በመጠቀም, Chaotropic ጨው ያለውን እርምጃ ስር (guanidine hydrochloride, guanidine isothiocyanate, ወዘተ) እና ውጫዊ መግነጢሳዊ መስክ, ዲ ኤን ኤ እና አር ኤን ኤ ደም, የእንስሳት ሕብረ, ምግብ, pathogenic ረቂቅ ተሕዋስያን እና ሌሎች ናሙናዎች ተነጥለው ነበር .


የልጥፍ ጊዜ: ማርች-18-2022