ፕሮቲኖችን መለየት እና ማጽዳት በባዮኬሚስትሪ ምርምር እና አተገባበር ውስጥ በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል እና ጠቃሚ የአሠራር ችሎታ ነው። የተለመደው የዩኩሪዮቲክ ሴል በሺዎች የሚቆጠሩ የተለያዩ ፕሮቲኖችን ሊይዝ ይችላል, አንዳንዶቹ በጣም ሀብታም እና አንዳንዶቹ ጥቂት ቅጂዎችን ብቻ ይይዛሉ. የተወሰነውን ለማጥናትፕሮቲን, በመጀመሪያ ፕሮቲን ከሌሎች ፕሮቲኖች እና ፕሮቲን ካልሆኑ ሞለኪውሎች ማጽዳት አስፈላጊ ነው.

1. የጨው-ውጭ ዘዴፕሮቲን:

ገለልተኛ ጨው በፕሮቲን መሟሟት ላይ ከፍተኛ ተጽዕኖ ያሳድራል. በአጠቃላይ ዝቅተኛ የጨው ክምችት ውስጥ የጨው ክምችት መጨመር, የፕሮቲን መሟሟት ይጨምራል. ይህ ጨው ይባላል; የጨው ክምችት መጨመር በሚቀጥልበት ጊዜ የፕሮቲን ሟሟነት ወደ ተለያዩ ዲግሪዎች ይቀንሳል እና አንዱን ከሌላው ይለያል. ይህ ክስተት ጨው ማውጣት ይባላል.

2. አይዞኤሌክትሪክ ነጥብ መቆለል ዘዴ፡-

ፕሮቲኑ የማይንቀሳቀስ በሚሆንበት ጊዜ በንጥሎች መካከል ያለው ኤሌክትሮስታቲክ መገለል በጣም ትንሹ ነው ፣ ስለሆነም መሟሟት በጣም ትንሹ ነው። የተለያዩ ፕሮቲኖች የ isoelectric ነጥቦች የተለያዩ ናቸው። የኮንዲሽነር መፍትሄ ፒኤች ወደ ፕሮቲን አይዞኤሌክትሪክ ነጥብ ለመድረስ ሊያገለግል ይችላል ፣ እንዲከማች ያድርጉት ፣ ግን ይህ ዘዴ ብዙ ጊዜ ብቻውን ጥቅም ላይ አይውልም እና ከጨው መውጫ ዘዴ ጋር ሊጣመር ይችላል።

3. ዳያሊሲስ እና ultrafiltration;

ዲያሊሲስ የተለያዩ ሞለኪውላዊ መጠኖች ያላቸውን ፕሮቲኖች ለመለየት ከፊል-permeable ሽፋን ይጠቀማል። የ ultrafiltration ዘዴ ከፍተኛ ግፊት ወይም ሴንትሪፉጋል ኃይል ይጠቀማል ውሃ እና ሌሎች ትናንሽ ሶሉት ሞለኪውሎች በከፊል የሚያልፍ ሽፋን ውስጥ እንዲያልፉ ለማድረግ.ፕሮቲንበሽፋኑ ላይ ይቀራል. የተለያዩ ሞለኪውላዊ ክብደት ያላቸውን ፕሮቲኖች ለመጥለፍ የተለያዩ ቀዳዳዎችን መምረጥ ይችላሉ።

4. ጄል የማጣራት ዘዴ;

የመጠን ማግለል ክሮማቶግራፊ ወይም ሞለኪውላር ሲቭ ክሮማቶግራፊ ተብሎም ይጠራል፣ ይህ የፕሮቲን ውህዶችን በሞለኪውላዊ መጠን ለመለየት በጣም ጠቃሚ ከሆኑ ዘዴዎች ውስጥ አንዱ ነው። በአምዱ ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውሉት የማሸጊያ እቃዎች ግሉኮስ ጄል (ሴፋዴክስ ጌድ) እና አጋሮሴ ጄል (agarose gel) ናቸው።

5. ኤሌክትሮፊዮሬሲስ;

በተመሳሳዩ የፒኤች ሁኔታ የተለያዩ ፕሮቲኖች በተለያየ ሞለኪውላዊ ክብደታቸው እና በኤሌክትሪክ መስክ የተለያዩ ክፍያዎች ምክንያት ሊለያዩ ይችላሉ. አምፖል እንደ ተሸካሚ የሚጠቀም ለ isoelectric set electrophoresis ትኩረት መስጠት ተገቢ ነው። በኤሌክትሮፊዮራይዝስ ጊዜ አምፖላይት ቀስ በቀስ ከአዎንታዊ ኤሌክትሮድ ወደ አሉታዊ ኤሌክትሮድ የተጨመረ የፒኤች ቅልመት ይፈጥራል። የተወሰነ ክፍያ ያለው ፕሮቲን በውስጡ ሲዋኝ እርስ በርስ ይደርሳል. የኤሌክትሪክ ነጥብ ፒኤች አቀማመጥ ይቋረጣል, እና ይህ ዘዴ የተለያዩ ፕሮቲኖችን ለመተንተን እና ለማዘጋጀት ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.

6.Ion የግንኙነት ክሮሞግራፊ;

የ ion የመገናኛ ወኪሎች የኬቲካል መገናኛ ወኪሎችን (እንደ ካርቦኪሜቲል ሴሉሎስ, ሲኤም-ሴሉሎስ) እና አኒዮኒክ የመገናኛ ወኪሎች (ዲቲላሚኖኤቲል ሴሉሎስ) ያካትታሉ. በ ion ኮሙኒኬሽን ክሮሞግራፊ አምድ ውስጥ በሚያልፉበት ጊዜ ከ ion የመገናኛ ወኪል ጋር ተቃራኒ ክፍያ ያለው ፕሮቲን በ ion ኮሙኒኬሽን ኤጀንት ላይ ይጣበቃል, ከዚያም ተዳሷል.ፕሮቲንየፒኤች ወይም የ ion ጥንካሬን በመቀየር ይቀልጣል.

7.አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ፡

የ Affinity chromatography ፕሮቲኖችን ለመለየት እጅግ በጣም ጠቃሚ ዘዴ ነው. ብዙውን ጊዜ ከፍተኛ ንፅህና ካለው የተዝረከረከ የፕሮቲን ድብልቅ ለማጣራት የተወሰነ ፕሮቲን ለመለየት አንድ እርምጃ ብቻ ይፈልጋል።

ይህ ዘዴ የተወሰኑ ፕሮቲኖችን ከሌላው ሞለኪውል ጋር ሊጋንድ (ሊጋንድ) ከሚባል ልዩ ሳይሆን ከኮቫንታል ትስስር ላይ የተመሰረተ ነው።

መሰረታዊ መርህ፡-

ፕሮቲኖች በቲሹዎች ወይም በሴሎች ውስጥ በተዘበራረቀ ድብልቅ ውስጥ ይገኛሉ ፣ እና እያንዳንዱ አይነት ሕዋስ በሺዎች የሚቆጠሩ የተለያዩ ፕሮቲኖችን ይይዛል። ስለዚህ, በፕሮቲኖች መካከል ያለው ልዩነት የባዮኬሚስትሪ አስፈላጊ አካል ነው, እና ብቻውን አልነበረም. ወይም ዝግጁ የሆኑ ዘዴዎች ስብስብ ማንኛውንም አይነት ፕሮቲን ከተመሰቃቀለ ድብልቅ ፕሮቲን ውስጥ ማስወገድ ይችላል, ስለዚህ ብዙ ዘዴዎች ብዙውን ጊዜ በጥምረት ጥቅም ላይ ይውላሉ.