Die skeiding en suiwering van proteïene word wyd gebruik in biochemiese navorsing en toepassing en is 'n belangrike operasionele vaardigheid. 'n Tipiese eukariotiese sel kan duisende verskillende proteïene bevat, sommige is baie ryk en sommige bevat slegs 'n paar kopieë. Ten einde 'n sekere te bestudeerproteïen, is dit nodig om eers die proteïen van ander proteïene en nie-proteïenmolekules te suiwer.

1. Uitsoutmetode vanproteïen:

Neutrale sout het 'n beduidende effek op die oplosbaarheid van proteïen. Oor die algemeen, met die toename in soutkonsentrasie onder lae soutkonsentrasie, neem die oplosbaarheid van proteïen toe. Dit word sout genoem; wanneer die soutkonsentrasie aanhou toeneem, Die oplosbaarheid van proteïen neem in verskillende grade af en skei die een na die ander uit. Hierdie verskynsel word uitsouting genoem.

2. Iso-elektriese puntstapelmetode:

Die elektrostatiese afstoting tussen deeltjies is die kleinste wanneer die proteïen staties is, dus is die oplosbaarheid ook die kleinste. Die iso-elektriese punte van verskeie proteïene verskil. Die pH van die kondisioneringsoplossing kan gebruik word om die iso-elektriese punt van 'n proteïen te bereik Laat dit ophoop, maar hierdie metode word selde alleen gebruik en kan gekombineer word met die uitsoutmetode.

3.Dialise en ultrafiltrasie:

Dialise gebruik 'n semi-deurlaatbare membraan om proteïene van verskillende molekulêre groottes te skei. Die ultrafiltrasiemetode gebruik hoë druk of sentrifugale krag om water en ander klein opgeloste stofmolekules deur 'n semi-deurlaatbare membraan te laat beweeg, terwyl dieproteïenbly op die membraan. Jy kan verskillende poriegroottes kies om proteïene van verskillende molekulêre gewigte te onderskep.

4.Gel filtrasie metode:

Ook genoem grootte-uitsluitingschromatografie of molekulêre sifchromatografie, dit is een van die nuttigste metodes om proteïenmengsels volgens molekulêre grootte te skei. Die meer algemeen gebruikte verpakkingsmateriaal in die kolom is glukosegel (Sephadex ged) en agarosegel (agarosegel).

5. Elektroforese:

Onder dieselfde pH-toestand kan verskeie proteïene geskei word as gevolg van hul verskillende molekulêre gewigte en verskillende ladings in die elektriese veld. Dit is die moeite werd om aandag te skenk aan iso-elektriese stel elektroforese, wat 'n amfoliet as 'n draer gebruik. Tydens elektroforese vorm die amfoliet 'n pH-gradiënt wat geleidelik vanaf die positiewe elektrode na die negatiewe elektrode gevoeg word. Wanneer die proteïen met 'n sekere lading daarin swem, sal dit mekaar bereik. Die pH-posisie van die elektriese punt is diskontinu, en hierdie metode kan gebruik word om verskeie proteïene te ontleed en voor te berei.

6.Ioonkommunikasiechromatografie:

ioonkommunikasiemiddels sluit in kationiese kommunikasiemiddels (soos karboksimetielsellulose; CM-sellulose) en anioniese kommunikasiemiddels (diëtielamino-etielsellulose). Wanneer deur die ioonkommunikasiechromatografiekolom gaan, word die proteïen met die teenoorgestelde lading as die ioonkommunikasiemiddel op die ioonkommunikasiemiddel geadsorbeer, en dan die geadsorbeerdeproteïenword geëlueer deur die pH of ioniese sterkte te verander.

7. Affiniteitschromatografie:

Affiniteitschromatografie is 'n uiters nuttige metode om proteïene te skei. Dit verg dikwels net een stap om 'n sekere proteïen wat gesuiwer moet word te skei van 'n morsige proteïenmengsel met hoë suiwerheid.

Hierdie metode is gebaseer op die spesifieke eerder as kovalente binding van sekere proteïene aan 'n ander molekule wat 'n ligand (Ligand) genoem word.

Die basiese beginsel:

proteïene bestaan ​​in 'n morsige mengsel in weefsels of selle, en elke tipe sel bevat duisende verskillende proteïene. Daarom is die onderskeid tussen proteïene 'n belangrike deel van biochemie, en dit was nie alleen nie. Of 'n stel gereedgemaakte metodes kan enige soort proteïen uit 'n morsige gemengde proteïen verwyder, so verskeie metodes word dikwels in kombinasie gebruik.